四川酶联ELISA***盒公司咨询***「中检维康」

ELISA***盒的操作方法——双夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3.　加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M***0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

ELISA***盒——会出现的问题及解决办法

阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因：微孔中的***未能充分混合。

解决办法： ***加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因：洗板过程发生问题。

解决办法：请随时监控洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

Elisa***盒技术原理

(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶标记。

(2). 结合在固相载体表面a的抗原或仍保持其活性。

(3). 酶标记的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。

(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或起反应。再加入酶标记的抗原或，也通过反应而结合在固相载体上。

(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以反应为基础，将抗原、的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏***很高的试验技术。

Elisa***盒操作步骤

1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑选：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。

3、 酶标记作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法'，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。

4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。