山西兽药残留ELISA***盒厂家信息推荐「中检维康」

ELISA***盒的应用技术

ELISA检测***盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa***盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

ELISA***盒——会出现的问题及解决办法

阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因：微孔中的***未能充分混合。

解决办法： ***加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因：洗板过程发生问题。

解决办法：请随时监控洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

Elisa***盒注意事项

Elisa***盒解冻与存放：-20℃取出后建议放入2～8℃冰箱中解冻约，每隔一段时间轻轻摇晃均匀，不可直接放入温度较高处解冻，避免因温度改变太大，造成蛋白质凝集而出现沉淀，其质量下降。若短期无法用完一瓶，建议无菌分装,再放回冷冻，避免反复冻融。4℃长时间保存后的变性脂蛋白及纤维蛋白，形成絮状物质变差。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置

3  样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置

4  吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用

5  不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间） 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。

6  偶联***（strept***idin-HRP）浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度

7  ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

8  没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9  样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。