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发布时间:2022-07-08 17:46:59
ELISA***盒检测过程中的注意事项
ELISA实验通用规则
ELISA***盒——会出现的问题及解决办法
吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因:室温太高(>25℃)。
解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因:底物溶液受到污染。
解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
c.原因:反应时间超过太久。
解决办法:请控制反应时间。
d.原因:酶标记物污染了盒内其它***。
解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免***间相互污染,凡是***(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)
Elisa***盒的操作注意事项
洗刷是ELISA***盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物,间断抗原***反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
断定效果须运用Elisa***盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡,灵敏度偏低
1 ***盒未充分平衡 ***盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有***已平衡至室温(约25℃)
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到*** 操作温和,移液枪不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间;
7 偶联HRP***污染 弃去***,重新配置
8 错误的稀释偶联HRP*** 弃去***,重新配置
9 TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响,需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间:人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数,确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板,建议使用ELISA高吸附力板子。
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